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2016年同等學(xué)力申碩西醫(yī)---分子生物學(xué)

  1、蛋白質(zhì)磷酸化及去磷酸化


  蛋白質(zhì)的磷酸化是指由蛋白質(zhì)激酶催化的把ATP或GTP上γ位的磷酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的過程,其逆轉(zhuǎn)過程是由蛋白質(zhì)磷酸酶催化的,稱為蛋白質(zhì)脫磷酸化。


  蛋白質(zhì)磷酸化通常發(fā)生在含羥基的氨基酸殘基,主要是絲氨酸,蘇氨酸,酪氨酸。


  2、蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)及生物活性


  一級結(jié)構(gòu) 二級結(jié)構(gòu) 三級結(jié)構(gòu) 四級結(jié)構(gòu)


  定義:蛋白質(zhì)分子中從N-C端的氨基酸序列 某一段肽鏈的局部主鏈空間結(jié)構(gòu) 在二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上單個(gè)多肽鏈進(jìn)一步折疊 兩個(gè)以上的亞基之間的空間排布和相互作用。


  表現(xiàn)形式 肽鏈 a-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)卷曲 結(jié)構(gòu)域、分子伴侶 亞基


  維系鍵 肽鍵、二硫鍵 氫鍵 疏水鍵、鹽鍵、氫鍵、Van der Waals力 氫鍵、離子鍵


  蛋白質(zhì)變性:是蛋白質(zhì)在受到光照、熱、有機(jī)溶劑以及一些變性劑的作用時(shí),次級鍵遭到破壞導(dǎo)致天然構(gòu)象的破壞,其特定的空間構(gòu)象被改變,但其一級結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變。


  蛋白質(zhì)復(fù)性:如果變性條件劇烈持久,蛋白質(zhì)的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈,這種變性作用是可逆的,說明蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化不大。這時(shí),如果除去變性因素,在適當(dāng)條件下變性蛋白質(zhì)可恢復(fù)其天然構(gòu)象和生物活性,這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)復(fù)性。例如胃蛋白酶加熱至80~90℃時(shí),失去溶解性,也無消化蛋白質(zhì)的能力,如將溫度再降低到37℃,則又可恢復(fù)溶解性和消化蛋白質(zhì)的能力。


  3、真核RNA聚合酶、原核RNA聚合酶、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等的作用。均是參與轉(zhuǎn)錄活動(dòng),非復(fù)制。


  1)增強(qiáng)子是增強(qiáng)基因啟動(dòng)子工作效率的順式作用序列,基因的轉(zhuǎn)錄作用將會(huì)加強(qiáng)。


  2)啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列,是控制轉(zhuǎn)錄的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。啟動(dòng)子就像“開關(guān)”,決定基因的活動(dòng)。


  #原核生物的RNA聚合酶:


  亞基功能


  a 決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄


  β 與轉(zhuǎn)錄全過程有關(guān)


  β’ 結(jié)合DNA模板


  の 辨認(rèn)起始點(diǎn)


  #真核生物的RNA聚合酶:


  種類 Ⅰ Ⅱ Ⅲ


  轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 45S-rRNA hnRNA 5S-rRNA、tRNA、snRNA


  對鵝膏覃堿的反應(yīng) 耐受 極敏感 中度敏感


  細(xì)胞內(nèi)定位 核仁 核質(zhì) 核質(zhì)


  #真核生物RNA聚合酶Ⅱ最大亞基的羧基末端有一段共有序列是Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重復(fù)序列片段,稱為羧基末端結(jié)構(gòu)域。所有的真核生物RNA聚合酶Ⅱ都有CTD,只是7個(gè)氨基酸共有序列的重復(fù)程度不同。CTD對維持細(xì)胞的活性是必需的。


  4、遺傳物質(zhì)的堿基組成、DNA的組成


  堿基共有5種:胞嘧啶(縮寫作C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T,DNA專有)和尿嘧啶(U,RNA專有)。


  核酸有核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)兩種。


  組成DNA(脫氧核糖核酸)的基本單位——脫氧核苷酸


  組成RNA(核糖核酸)的基本單位——核苷酸


  組成多糖的基本單位——單糖


  組成蛋白質(zhì)的基本單位——氨基酸


  脂肪是甘油和三分子脂肪酸合成的甘油三酯。


  5、酶活性調(diào)節(jié)的三種方式:


  1)酶原激活:酶原向酶轉(zhuǎn)化的過程,一定條件下酶前體水解開特定的肽鍵致使構(gòu)象改變而表現(xiàn)出酶的活性的過程,實(shí)際上是酶活性中心形成或暴露的過程。采用蛋白酶解方式激活的是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧基肽酶、彈性蛋白酶等。


  2)變構(gòu)調(diào)節(jié):體內(nèi)一些代謝產(chǎn)物可與某些酶分子活性中心以外部位可逆結(jié)合,使酶發(fā)生變構(gòu)并改變其催化活性,這種調(diào)節(jié)方式為變構(gòu)調(diào)節(jié)。采用別構(gòu)調(diào)節(jié)方式激活的是天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(ATCase)。


  3)共價(jià)修飾:酶蛋白肽鏈上一些基團(tuán)可與某種化學(xué)集團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合從而改變酶活性的過程。


  6、真核生物轉(zhuǎn)錄過程中的剪接及GU-AG規(guī)則(2011年、2012年各考了一道題)


  剪接的過程就是真核生物基因轉(zhuǎn)錄過程中對mRNA前體進(jìn)行的加工方式,是按照GU-AG規(guī)則進(jìn)行的。GU-AG規(guī)則是指真核生物轉(zhuǎn)錄生成初級RNA轉(zhuǎn)錄物,RNA 內(nèi)含子序列5’端的起始兩個(gè)核苷酸總是5’-GU-3’,并且其3’端的最后兩個(gè)核苷酸總是5’-AG-3’,5’-GU-3’和5’-AG-3’稱為剪接接口,剪接后,能除去初級mRNA上的內(nèi)含子,把外顯子連接為成熟的mRNA。


  7、真核生物DNA聚合酶、原核生物DNA聚合酶的作用(2011年考2道題、2012年考1題)


  原核細(xì)胞有3種DNA聚合酶,分別是DNA聚合酶I、 DNA聚合酶II、 DNA聚合酶III。


  DNA聚合酶I:切除引物,對復(fù)制中的錯(cuò)誤進(jìn)行較讀,對復(fù)制和修復(fù)中出現(xiàn)的空隙進(jìn)行填補(bǔ)。


  DNA聚合酶II:參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)(SOS修復(fù))。


  DNA聚合酶III:催化原核生物的復(fù)制延長。


  I II III


  5’-3’核酸外切酶活性 + — —


  3’-5’核酸外切酶活性 + + +


  5’-3’核酸聚合酶活性 + + +


  (3’-5’核酸外切酶活性:能辨認(rèn)錯(cuò)配的堿基對,并切除,具有校正功能。5’-3’核酸外切酶活性:能切除突變的DNA片段。)


  8、真核細(xì)胞有5種DNA聚合酶,分別為DNA聚合酶α,β,γ,δ,ε。


  DNA聚合酶α具有引物酶活性,合成引物,起始引發(fā)作用。


  DNA聚合酶β損傷修復(fù)功能。


  DNA聚合酶γ參與線粒體復(fù)制。


  DNA聚合酶δ對真核生物的復(fù)制延長起催化作用,類似于原核生物的聚合酶III。


  DNA聚合酶ε起校對、修復(fù)和填補(bǔ)空隙作用,相當(dāng)于原核生物的聚合酶I。


  α β γ δ ε


  5’-3’核酸外切酶活性 + + + + +


  3’-5’核酸外切酶活性 — — + + +


  核酶:具有催化活性的RNA。


  9、逆轉(zhuǎn)錄


  逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程,過程是逆轉(zhuǎn)錄酶以dNTP為底物,以RNA為模板,tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物,在tRNA的3′-H末端上,按5′→3′方向,合成一條與RNA模板互補(bǔ)的DNA單鏈,這條DNA單鏈叫做互補(bǔ)DNA(cDNA),它與RNA模板形成RNA-DNA雜交體。隨后又在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,水解掉RNA鏈,再以cDNA為模板合成第二條DNA鏈。完成由RNA指導(dǎo)的DNA合成過程。


  10、轉(zhuǎn)錄因子


  轉(zhuǎn)錄因子是真核基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的非RNA聚合酶本身組分的蛋白質(zhì)。(不是RNA聚合酶的亞基。)


  在真核細(xì)胞中與RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子分別稱為TFⅠ、TFⅡ、TFⅢ,不同基因由不同的上游啟動(dòng)子元件組成,能與不同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。(不同的RNA聚合酶有不同的相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子。)


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