1、蛋白質磷酸化及去磷酸化

　　蛋白質的磷酸化是指由蛋白質激酶催化的把ATP或GTP上γ位的磷酸基轉移到底物蛋白質氨基酸殘基上的過程，其逆轉過程是由蛋白質磷酸酶催化的，稱為蛋白質脫磷酸化。

　　蛋白質磷酸化通常發(fā)生在含羥基的氨基酸殘基，主要是絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。

　　2、蛋白質的分子結構及生物活性

　　一級結構 二級結構 三級結構 四級結構

　　定義：蛋白質分子中從N-C端的氨基酸序列 某一段肽鏈的局部主鏈空間結構 在二級結構基礎上單個多肽鏈進一步折疊 兩個以上的亞基之間的空間排布和相互作用。

　　表現(xiàn)形式 肽鏈 a-螺旋、β-折疊、β-轉角、無規(guī)卷曲 結構域、分子伴侶 亞基

　　維系鍵 肽鍵、二硫鍵 氫鍵 疏水鍵、鹽鍵、氫鍵、Van der Waals力 氫鍵、離子鍵

　　蛋白質變性：是蛋白質在受到光照、熱、有機溶劑以及一些變性劑的作用時，次級鍵遭到破壞導致天然構象的破壞，其特定的空間構象被改變，但其一級結構不發(fā)生改變。

　　蛋白質復性：如果變性條件劇烈持久，蛋白質的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈，這種變性作用是可逆的，說明蛋白質分子內部結構的變化不大。這時，如果除去變性因素，在適當條件下變性蛋白質可恢復其天然構象和生物活性，這種現(xiàn)象稱為蛋白質復性。例如胃蛋白酶加熱至80～90℃時，失去溶解性，也無消化蛋白質的能力，如將溫度再降低到37℃，則又可恢復溶解性和消化蛋白質的能力。

　　3、真核RNA聚合酶、原核RNA聚合酶、啟動子、增強子等的作用。均是參與轉錄活動，非復制。

　　1)增強子是增強基因啟動子工作效率的順式作用序列，基因的轉錄作用將會加強。

　　2)啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是控制轉錄的起始時間和表達的程度。啟動子就像“開關”，決定基因的活動。

　　#原核生物的RNA聚合酶：

　　亞基功能

　　a 決定哪些基因被轉錄

　　β 與轉錄全過程有關

　　β’ 結合DNA模板

　　の 辨認起始點

　　#真核生物的RNA聚合酶:

　　種類 Ⅰ Ⅱ Ⅲ

　　轉錄產物 45S-rRNA hnRNA 5S-rRNA、tRNA、snRNA

　　對鵝膏覃堿的反應 耐受 極敏感 中度敏感

　　細胞內定位 核仁 核質 核質

　　#真核生物RNA聚合酶Ⅱ最大亞基的羧基末端有一段共有序列是Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重復序列片段，稱為羧基末端結構域。所有的真核生物RNA聚合酶Ⅱ都有CTD，只是7個氨基酸共有序列的重復程度不同。CTD對維持細胞的活性是必需的。

　　4、遺傳物質的堿基組成、DNA的組成

　　堿基共有5種：胞嘧啶(縮寫作C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T，DNA專有)和尿嘧啶(U，RNA專有)。

　　核酸有核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)兩種。

　　組成DNA(脫氧核糖核酸)的基本單位——脫氧核苷酸

　　組成RNA(核糖核酸)的基本單位——核苷酸

　　組成多糖的基本單位——單糖

　　組成蛋白質的基本單位——氨基酸

　　脂肪是甘油和三分子脂肪酸合成的甘油三酯。

　　5、酶活性調節(jié)的三種方式：

　　1)酶原激活：酶原向酶轉化的過程，一定條件下酶前體水解開特定的肽鍵致使構象改變而表現(xiàn)出酶的活性的過程，實際上是酶活性中心形成或暴露的過程。采用蛋白酶解方式激活的是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧基肽酶、彈性蛋白酶等。

　　2)變構調節(jié)：體內一些代謝產物可與某些酶分子活性中心以外部位可逆結合，使酶發(fā)生變構并改變其催化活性，這種調節(jié)方式為變構調節(jié)。采用別構調節(jié)方式激活的是天冬氨酸轉氨甲酰酶(ATCase)。

　　3)共價修飾：酶蛋白肽鏈上一些基團可與某種化學集團發(fā)生可逆的共價結合從而改變酶活性的過程。

　　6、真核生物轉錄過程中的剪接及GU-AG規(guī)則(2011年、2012年各考了一道題)

　　剪接的過程就是真核生物基因轉錄過程中對mRNA前體進行的加工方式，是按照GU-AG規(guī)則進行的。GU-AG規(guī)則是指真核生物轉錄生成初級RNA轉錄物，RNA 內含子序列5’端的起始兩個核苷酸總是5’-GU-3’，并且其3’端的最后兩個核苷酸總是5’-AG-3’，5’-GU-3’和5’-AG-3’稱為剪接接口，剪接后，能除去初級mRNA上的內含子，把外顯子連接為成熟的mRNA。

　　7、真核生物DNA聚合酶、原核生物DNA聚合酶的作用(2011年考2道題、2012年考1題)

　　原核細胞有3種DNA聚合酶，分別是DNA聚合酶I、 DNA聚合酶II、 DNA聚合酶III。

　　DNA聚合酶I：切除引物，對復制中的錯誤進行較讀，對復制和修復中出現(xiàn)的空隙進行填補。

　　DNA聚合酶II：參與DNA損傷的應急狀態(tài)修復(SOS修復)。

　　DNA聚合酶III：催化原核生物的復制延長。

　　I II III

　　5’-3’核酸外切酶活性 + — —

　　3’-5’核酸外切酶活性 + + +

　　5’-3’核酸聚合酶活性 + + +

　　(3’-5’核酸外切酶活性：能辨認錯配的堿基對，并切除，具有校正功能。5’-3’核酸外切酶活性：能切除突變的DNA片段。)

　　8、真核細胞有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶α，β，γ，δ，ε。

　　DNA聚合酶α具有引物酶活性，合成引物，起始引發(fā)作用。

　　DNA聚合酶β損傷修復功能。

　　DNA聚合酶γ參與線粒體復制。

　　DNA聚合酶δ對真核生物的復制延長起催化作用，類似于原核生物的聚合酶III。

　　DNA聚合酶ε起校對、修復和填補空隙作用，相當于原核生物的聚合酶I。

　　α β γ δ ε

　　5’-3’核酸外切酶活性 + + + + +

　　3’-5’核酸外切酶活性 — — + + +

　　核酶：具有催化活性的RNA。

　　9、逆轉錄

　　逆轉錄是以RNA為模板合成DNA的過程，過程是逆轉錄酶以dNTP為底物，以RNA為模板，tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物，在tRNA的3′-H末端上，按5′→3′方向，合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈，這條DNA單鏈叫做互補DNA(cDNA)，它與RNA模板形成RNA-DNA雜交體。隨后又在反轉錄酶的作用下，水解掉RNA鏈，再以cDNA為模板合成第二條DNA鏈。完成由RNA指導的DNA合成過程。

　　10、轉錄因子

　　轉錄因子是真核基因轉錄起始所必需的非RNA聚合酶本身組分的蛋白質。(不是RNA聚合酶的亞基。)

　　在真核細胞中與RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相應的轉錄因子分別稱為TFⅠ、TFⅡ、TFⅢ，不同基因由不同的上游啟動子元件組成，能與不同的轉錄因子結合。(不同的RNA聚合酶有不同的相應的轉錄因子。)

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