1、蛋白質(zhì)磷酸化及去磷酸化
蛋白質(zhì)的磷酸化是指由蛋白質(zhì)激酶催化的把ATP或GTP上γ位的磷酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的過程,其逆轉(zhuǎn)過程是由蛋白質(zhì)磷酸酶催化的,稱為蛋白質(zhì)脫磷酸化。
蛋白質(zhì)磷酸化通常發(fā)生在含羥基的氨基酸殘基,主要是絲氨酸,蘇氨酸,酪氨酸。
2、蛋白質(zhì)的分子結(jié)構及生物活性
一級結(jié)構 二級結(jié)構 三級結(jié)構 四級結(jié)構
定義 蛋白質(zhì)分子中從N-C端的氨基酸序列 某一段肽鏈的局部主鏈空間結(jié)構 在二級結(jié)構基礎上單個多肽鏈進一步折疊 兩個以上的亞基之間的空間排布和相互作用。
表現(xiàn)形式 肽鏈 a-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)卷曲 結(jié)構域、分子伴侶 亞基
維系鍵 肽鍵、二硫鍵 氫鍵 疏水鍵、鹽鍵、氫鍵、Van der Waals力 氫鍵、離子鍵
蛋白質(zhì)變性:是蛋白質(zhì)在受到光照、熱、有機溶劑以及一些變性劑的作用時,次級鍵遭到破壞導致天然構象的破壞,其特定的空間構象被改變,但其一級結(jié)構不發(fā)生改變。
蛋白質(zhì)復性:如果變性條件劇烈持久,蛋白質(zhì)的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈,這種變性作用是可逆的,說明蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構的變化不大。這時,如果除去變性因素,在適當條件下變性蛋白質(zhì)可恢復其天然構象和生物活性,這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)復性。例如胃蛋白酶加熱至80~90℃時,失去溶解性,也無消化蛋白質(zhì)的能力,如將溫度再降低到37℃,則又可恢復溶解性和消化蛋白質(zhì)的能力。
3、真核RNA聚合酶、原核RNA聚合酶、啟動子、增強子等的作用。
均是參與轉(zhuǎn)錄活動,非復制。
1)增強子是增強基因啟動子工作效率的順式作用序列,基因的轉(zhuǎn)錄作用將會加強。
2)啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列,是控制轉(zhuǎn)錄的起始時間和表達的程度。啟動子就像“開關”,決定基因的活動。
#原核生物的RNA聚合酶:
亞基功能
a 決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄
β 與轉(zhuǎn)錄全過程有關
β’ 結(jié)合DNA模板
の 辨認起始點
#真核生物的RNA聚合酶:
種類 Ⅰ Ⅱ Ⅲ
轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 45S-rRNA hnRNA 5S-rRNA、tRNA、snRNA
對鵝膏覃堿的反應 耐受 極敏感 中度敏感
細胞內(nèi)定位 核仁 核質(zhì) 核質(zhì)
#真核生物RNA聚合酶Ⅱ最大亞基的羧基末端有一段共有序列是Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重復序列片段,稱為羧基末端結(jié)構域。所有的真核生物RNA聚合酶Ⅱ都有CTD,只是7個氨基酸共有序列的重復程度不同。CTD對維持細胞的活性是必需的。
4、遺傳物質(zhì)的堿基組成、DNA的組成
堿基共有5種:胞嘧啶(縮寫作C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T,DNA專有)和尿嘧啶(U,RNA專有)。
核酸有核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)兩種。
組成DNA(脫氧核糖核酸)的基本單位——脫氧核苷酸
組成RNA(核糖核酸)的基本單位——核苷酸
組成多糖的基本單位——單糖
組成蛋白質(zhì)的基本單位——氨基酸
脂肪是甘油和三分子脂肪酸合成的甘油三酯。
5、酶活性調(diào)節(jié)的三種方式:
1)酶原激活:酶原向酶轉(zhuǎn)化的過程,一定條件下酶前體水解開特定的肽鍵致使構象改變而表現(xiàn)出酶的活性的過程,實際上是酶活性中心形成或暴露的過程。采用蛋白酶解方式激活的是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧基肽酶、彈性蛋白酶等。
2)變構調(diào)節(jié):體內(nèi)一些代謝產(chǎn)物可與某些酶分子活性中心以外部位可逆結(jié)合,使酶發(fā)生變構并改變其催化活性,這種調(diào)節(jié)方式為變構調(diào)節(jié)。采用別構調(diào)節(jié)方式激活的是天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(ATCase)。
3)共價修飾:酶蛋白肽鏈上一些基團可與某種化學集團發(fā)生可逆的共價結(jié)合從而改變酶活性的過程。
6、真核生物轉(zhuǎn)錄過程中的剪接及GU-AG規(guī)則(2011年、2012年各考了一道題)
剪接的過程就是真核生物基因轉(zhuǎn)錄過程中對mRNA前體進行的加工方式,是按照GU-AG規(guī)則進行的。GU-AG規(guī)則是指真核生物轉(zhuǎn)錄生成初級RNA轉(zhuǎn)錄物,RNA 內(nèi)含子序列5’端的起始兩個核苷酸總是5’-GU-3’,并且其3’端的最后兩個核苷酸總是5’-AG-3’,5’-GU-3’和5’-AG-3’稱為剪接接口,剪接后,能除去初級mRNA上的內(nèi)含子,把外顯子連接為成熟的mRNA。
7、逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程,過程是逆轉(zhuǎn)錄酶以dNTP為底物,以RNA為模板,tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物,在tRNA的3′-H末端上,按5′→3′方向,合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈,這條DNA單鏈叫做互補DNA(cDNA),它與RNA模板形成RNA-DNA雜交體。隨后又在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,水解掉RNA鏈,再以cDNA為模板合成第二條DNA鏈。完成由RNA指導的DNA合成過程。
8、轉(zhuǎn)錄因子
轉(zhuǎn)錄因子是真核基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的非RNA聚合酶本身組分的蛋白質(zhì)。(不是RNA聚合酶的亞基。)
在真核細胞中與RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相應的轉(zhuǎn)錄因子分別稱為TFⅠ、TFⅡ、TFⅢ,不同基因由不同的上游啟動子元件組成,能與不同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。(不同的RNA聚合酶有不同的相應的轉(zhuǎn)錄因子。)
注意鑒別:決定轉(zhuǎn)錄效率是增強子。
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