1.蛋白質(zhì)磷酸化及去磷酸化

　　蛋白質(zhì)的磷酸化是指由蛋白質(zhì)激酶催化的把ATP或GTP上γ位的磷酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的過程，其逆轉(zhuǎn)過程是由蛋白質(zhì)磷酸酶催化的，稱為蛋白質(zhì)脫磷酸化。

　　蛋白質(zhì)磷酸化通常發(fā)生在含羥基的氨基酸殘基，主要是絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。

　　2.蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)及生物活性

　　一級(jí)結(jié)構(gòu) 二級(jí)結(jié)構(gòu) 三級(jí)結(jié)構(gòu) 四級(jí)結(jié)構(gòu)

　　定義 蛋白質(zhì)分子中從N-C端的氨基酸序列 某一段肽鏈的局部主鏈空間結(jié)構(gòu) 在二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上單個(gè)多肽鏈進(jìn)一步折疊 兩個(gè)以上的亞基之間的空間排布和相互作用。

　　表現(xiàn)形式 肽鏈 a-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)卷曲 結(jié)構(gòu)域、分子伴侶 亞基

　　維系鍵 肽鍵、二硫鍵 氫鍵 疏水鍵、鹽鍵、氫鍵、Van der Waals力 氫鍵、離子鍵

　　蛋白質(zhì)變性：是蛋白質(zhì)在受到光照、熱、有機(jī)溶劑以及一些變性劑的作用時(shí)，次級(jí)鍵遭到破壞導(dǎo)致天然構(gòu)象的破壞，其特定的空間構(gòu)象被改變，但其一級(jí)結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變。

　　蛋白質(zhì)復(fù)性：如果變性條件劇烈持久，蛋白質(zhì)的變性是不可逆的。如果變性條件不劇烈，這種變性作用是可逆的，說明蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化不大。這時(shí)，如果除去變性因素，在適當(dāng)條件下變性蛋白質(zhì)可恢復(fù)其天然構(gòu)象和生物活性，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)復(fù)性。例如胃蛋白酶加熱至80～90℃時(shí)，失去溶解性，也無消化蛋白質(zhì)的能力，如將溫度再降低到37℃，則又可恢復(fù)溶解性和消化蛋白質(zhì)的能力。

　　3.真核RNA聚合酶、原核RNA聚合酶、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等的作用。

　　均是參與轉(zhuǎn)錄活動(dòng)，非復(fù)制。

　　1)增強(qiáng)子是增強(qiáng)基因啟動(dòng)子工作效率的順式作用序列，基因的轉(zhuǎn)錄作用將會(huì)加強(qiáng)。

　　2)啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是控制轉(zhuǎn)錄的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。啟動(dòng)子就像“開關(guān)”，決定基因的活動(dòng)。

　　#原核生物的RNA聚合酶：

　　亞基功能

　　a 決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄

　　β 與轉(zhuǎn)錄全過程有關(guān)

　　β’ 結(jié)合DNA模板

　　の 辨認(rèn)起始點(diǎn)

　　#真核生物的RNA聚合酶:

　　種類 Ⅰ Ⅱ Ⅲ

　　轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 45S-rRNA hnRNA 5S-rRNA、tRNA、snRNA

　　對(duì)鵝膏覃堿的反應(yīng) 耐受 極敏感 中度敏感

　　細(xì)胞內(nèi)定位 核仁 核質(zhì) 核質(zhì)

　　#真核生物RNA聚合酶Ⅱ最大亞基的羧基末端有一段共有序列是Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重復(fù)序列片段，稱為羧基末端結(jié)構(gòu)域。所有的真核生物RNA聚合酶Ⅱ都有CTD，只是7個(gè)氨基酸共有序列的重復(fù)程度不同。CTD對(duì)維持細(xì)胞的活性是必需的。

　　4.遺傳物質(zhì)的堿基組成、DNA的組成

　　堿基共有5種：胞嘧啶(縮寫作C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T，DNA專有)和尿嘧啶(U，RNA專有)。

　　核酸有核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)兩種。

　　組成DNA(脫氧核糖核酸)的基本單位——脫氧核苷酸

　　組成RNA(核糖核酸)的基本單位——核苷酸

　　組成多糖的基本單位——單糖

　　組成蛋白質(zhì)的基本單位——氨基酸

　　脂肪是甘油和三分子脂肪酸合成的甘油三酯。

　　5.酶活性調(diào)節(jié)的三種方式：

　　1)酶原激活：酶原向酶轉(zhuǎn)化的過程，一定條件下酶前體水解開特定的肽鍵致使構(gòu)象改變而表現(xiàn)出酶的活性的過程，實(shí)際上是酶活性中心形成或暴露的過程。采用蛋白酶解方式激活的是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧基肽酶、彈性蛋白酶等。

　　2)變構(gòu)調(diào)節(jié)：體內(nèi)一些代謝產(chǎn)物可與某些酶分子活性中心以外部位可逆結(jié)合，使酶發(fā)生變構(gòu)并改變其催化活性，這種調(diào)節(jié)方式為變構(gòu)調(diào)節(jié)。采用別構(gòu)調(diào)節(jié)方式激活的是天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(ATCase)。

　　3)共價(jià)修飾：酶蛋白肽鏈上一些基團(tuán)可與某種化學(xué)集團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合從而改變酶活性的過程。

　　6.真核生物轉(zhuǎn)錄過程中的剪接及GU-AG規(guī)則(2011年、2012年各考了一道題)

　　剪接的過程就是真核生物基因轉(zhuǎn)錄過程中對(duì)mRNA前體進(jìn)行的加工方式，是按照GU-AG規(guī)則進(jìn)行的。GU-AG規(guī)則是指真核生物轉(zhuǎn)錄生成初級(jí)RNA轉(zhuǎn)錄物，RNA 內(nèi)含子序列5’端的起始兩個(gè)核苷酸總是5’-GU-3’，并且其3’端的最后兩個(gè)核苷酸總是5’-AG-3’，5’-GU-3’和5’-AG-3’稱為剪接接口，剪接后，能除去初級(jí)mRNA上的內(nèi)含子，把外顯子連接為成熟的mRNA。

　　7.真核生物DNA聚合酶、原核生物DNA聚合酶的作用(2011年考2道題、2012年考1題)

　　原核細(xì)胞有3種DNA聚合酶，分別是DNA聚合酶I、 DNA聚合酶II、 DNA聚合酶III。

　　DNA聚合酶I：切除引物，對(duì)復(fù)制中的錯(cuò)誤進(jìn)行較讀，對(duì)復(fù)制和修復(fù)中出現(xiàn)的空隙進(jìn)行填補(bǔ)。

　　DNA聚合酶II：參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)(SOS修復(fù))。

　　DNA聚合酶III：催化原核生物的復(fù)制延長(zhǎng)。

　　I II III

　　5’-3’核酸外切酶活性 + — —

　　3’-5’核酸外切酶活性 + + +

　　5’-3’核酸聚合酶活性 + + +

　　(3’-5’核酸外切酶活性：能辨認(rèn)錯(cuò)配的堿基對(duì)，并切除，具有校正功能。5’-3’核酸外切酶活性：能切除突變的DNA片段。)

　　8.真核細(xì)胞有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶α，β，γ，δ，ε。

　　DNA聚合酶α具有引物酶活性，合成引物，起始引發(fā)作用。

　　DNA聚合酶β損傷修復(fù)功能。

　　DNA聚合酶γ參與線粒體復(fù)制。

　　DNA聚合酶δ對(duì)真核生物的復(fù)制延長(zhǎng)起催化作用，類似于原核生物的聚合酶III。

　　DNA聚合酶ε起校對(duì)、修復(fù)和填補(bǔ)空隙作用，相當(dāng)于原核生物的聚合酶I。

　　α β γ δ ε

　　5’-3’核酸外切酶活性 + + + + +

　　3’-5’核酸外切酶活性 — — + + +

　　核酶：具有催化活性的RNA。

　　9.逆轉(zhuǎn)錄

　　逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，過程是逆轉(zhuǎn)錄酶以dNTP為底物，以RNA為模板，tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物，在tRNA的3′-H末端上，按5′→3′方向，合成一條與RNA模板互補(bǔ)的DNA單鏈，這條DNA單鏈叫做互補(bǔ)DNA(cDNA)，它與RNA模板形成RNA-DNA雜交體。隨后又在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，水解掉RNA鏈，再以cDNA為模板合成第二條DNA鏈。完成由RNA指導(dǎo)的DNA合成過程。

　　10.轉(zhuǎn)錄因子

　　轉(zhuǎn)錄因子是真核基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的非RNA聚合酶本身組分的蛋白質(zhì)。(不是RNA聚合酶的亞基。)

　　在真核細(xì)胞中與RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子分別稱為TFⅠ、TFⅡ、TFⅢ，不同基因由不同的上游啟動(dòng)子元件組成，能與不同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。(不同的RNA聚合酶有不同的相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子。)

　　注意鑒別：決定轉(zhuǎn)錄效率是增強(qiáng)子。